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    土壤過氧化氫酶 (Solid- Catalase S- CAT)試劑盒說明書

    提 供 商: 上海研謹生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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    詳細介紹

    土壤過氧化氫酶 (Solid- Catalase    S- CAT)試劑盒說明書 

    微量法

    注意:正式測定前務必取2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

    規格 : 100T/48S

    產品內容:

    試劑一:液體 × 1  瓶,4℃保存; 臨用前加入29 .7mL  蒸餾水充分溶解后待用;用不完的試劑4℃ 保存;

    試劑二:粉劑× 1  瓶,4℃保存;臨用前加入1mL  蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存; 試劑三:液體× 1  瓶,4℃保存。

    產品說明:

    S-CAT  是土壤微生物代謝的重要酶類,在H2O2 清除系統中具有重要作用。

    H2O2   在240nm  下有特征吸收峰,通過測定與土壤反應后溶液在此波長下吸光度的變化,即可 反應S-CAT  活性的高低。

    需自備的儀器和用品:

    紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板 (UV 板) 和蒸餾水

    操作步驟:

    -、     樣品處理:

    新鮮土樣自然風干或 37  度烘箱風干,過 30~50   目篩。

    、   測定步驟:

    1 、  分光光度計或酶標儀預熱30min 以上,調節波長至240nm ,蒸餾水調零。

    2 、 加樣表

    試劑名稱測定管無基質管無土管

    風干土樣 (g)0.030.03

    試劑一 (μL)260260

    雙蒸水 (μL)260

    25℃振蕩培養 20min

    試劑二 (μL)101010

    混勻 8000g ,25℃離心 5min ,取全部上清

    試劑三 (μL)303030

    混勻,取200uL  至微量石英比色皿或96  孔板中,240nm  處記錄各管吸光值A。 注意:  每個測定管要設一個無基質管,無土管只要做一管。

    三、      S-CAT 活性計算:


    A 、用微量石英比色皿測定的計算公式如下

    單位的定義:每天每g  風干土樣催化1μmol H2O2   降解定義為一個酶活力單位。

    計算公式:S-CAT   (μmol/d/g) =[(A  無土管-A  測定管+A 無基質管)×V  反總÷   ( ε×d) × 106]÷W÷T= 16.5 ×   (A  無土管-A  測定管+A 無基質管)

    V  反總:反應體系總體積,3 × 10-4 L ;ε  :過氧化氫摩爾消光系數,4.36× 104 L / mol /cm;d: 比

    色皿光徑,1cm;  T :反應時間,20 min= 1/72d;  W:樣本質量,0.03g。

    B 、用96 孔板測定的計算公式如下

    單位的定義:每天每g  風干土樣催化1μmol H2O2   降解定義為一個酶活力單位。

    計算公式:S-CAT   (μmol/d/g) =[(A  無土管-A  測定管+A 無基質管)×V  反總÷   ( ε×d) × 106]÷W÷T=33 ×   (A  無土管-A  測定管+A  無基質管)

    V  反總:反應體系總體積,3 × 10-4 L ;ε :過氧化氫摩爾消光系數,4.36× 104 L / mol /cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;  T :反應時間,20 min= 1/72d;  W:樣品質量,0.03g。


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