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    土壤酸性轉化酶 (S-AI) 活性檢測試劑盒

    提 供 商: 上海研謹生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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    詳細介紹

    壤酸性轉化酶 (S-AI) 活性檢測試劑盒

    見分光光度法

    意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

    格:50T/24S

    產品內容

    一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

    試劑二:×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用;用不完的試劑 4℃保存; 試劑三液體 20mL×1 瓶,4℃保存。

    標準品:粉劑×1 支,4℃保存,10mg 無水葡萄糖。臨用前加入 1mL 試劑一溶解,制備 10mg/mL 萄糖標準液備用。

    產品說明

    S-AI  pH 為 4.5~5.0  (酸性) 條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗 糖代謝關鍵酶之一。

    S-AI 催化蔗糖降解產生還原糖,進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物, 在 540nm 有特征光吸收,在一定范圍內 540nm 光吸收增加速率與 AI 活性成正比。

    試驗中所需的儀器和試劑:

    分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水、甲苯。

    作步驟:

    、樣品處理:

    新鮮樣自然風干或 37℃烘箱風干,過 30~50  目篩。

    、測定步驟及加樣表:

    、光光度計/酶標儀預熱 30min ,波長調至 540nm ,蒸餾水調零。

    、標準液的稀釋:將 10mg/mL 葡萄糖標準液用試劑一稀釋至 、、、、0.8 、0.6 mg/mL 葡萄糖標準溶液備用。

    、加樣表:

    劑名稱

    定管

    對照管

    準管

    白管

    土樣 (g)

    0.1

    0.1

    -

    -

    劑一 (μL)

    -

    800

    -

    800

    劑二 (μL)

    800

    -

    -

    -

    準液 (μL)

    -

    -

    800

    -

    甲苯 (μL)

    20

    20

    20

    20

    混勻,37℃準確水浴 1h 后,煮沸 10min 左右 (蓋緊,以防止水分散失) ,流水或冰浴冷

     


     

     

     

    卻后充分混勻 (以保證濃度不變) ,10000rpm,常溫離心 10min,取上清 150μL 與 600μL  劑一混合即將上清液稀釋 5 倍。

    上清稀釋液 (μL)

    700

    700

    700

    700

    劑三 (μL)

    300

    300

    300

    300

    ,煮沸 10min 左右 (蓋緊,以防止水分流失) ,流水冷卻后充分混勻,540nm 處蒸餾水調

    ,記錄各管吸光值A ,記為 A 測定管、A 對照管、A 標準管、A 空白管。計算ΔA=A 測定管-A 對照 ,ΔA 標準=A 標準管-A 空白管。

    三、S-AI 活性計算:

    1 、  標準曲線的繪制:

    萄糖濃度為 x 軸,相應的ΔA 標準為 y 軸,繪制標準曲線,得到標準方程 y=kx+b;將ΔA  式得到 x  mg/mL)

    2 、  S-AI 活性計算

    單位義:37℃每 g 土壤每天產生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。

    S-AI  (U/g=x×V 酶促÷W÷T

    V 酶促:酶促反應總體積,0.820mL;W:樣本鮮重,g;T:反應時間:1/24d;

    注意事項:

    1 、如果加入試劑三,煮沸 10min 后有混濁物出現,建議離心除去沉淀 (10000rpm ,2min ) ,取上 測定吸光度;

    、如果吸光值大于 ,可以將上清液再進行稀釋;若吸光值較小,可以減少上清液稀釋倍數。兩種 作均要注意改變公式中的稀釋倍數。


     2 頁 共 2 頁


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