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    酶活性檢測過程中會受哪些因素影響
    點擊次數:1125 更新時間:2022-04-24
      由于酶具有高度的專一催化活性,故可通過測定其相應的底物或產物濃度變化,或用某一反應產物或反應物濃度變化來確定其酶的活性。
      一般采用電化學和光物理的方法,即利用反應物或產物的吸光性,用紫外分光光度法或熒光法測定。若酶反應過程中產物或反應物有氣體,則可用測壓儀(瓦氏呼吸儀)測定。若反應過程中生成酸,則可用電化學法。用同位素標記的底物則可用放射化學法測定底物濃度變化,計算酶活性。一些性質穩定的酶,也可用高效液相色譜法檢測。
      酶活性檢測中可能影響的因素:
      1.鹽濃度:大多數酶不能耐受*的鹽濃度。離子干擾弱離子鍵的蛋白質。典型的酶在1-500mM的鹽濃度下具有活性。例如嗜鹽藻類和細菌。
      溫度的影響:所有酶都在生物體*的溫度范圍內起作用。溫度升高通常會導致反應速率增加。較高的溫度會導致反應速率急劇下降。這是由于弱離子和氫鍵的分解導致的穩定了酶活性位點的三維結構的蛋白質結構的變性(改變)。人體酶的溫度通常在35到40°C之間。人類的平均溫度是37°C。人體酶在高于40°C的溫度下開始迅速變性。來自嗜熱的酶在溫泉中發現的古菌在高達100°C時穩定。酶反應的“最佳”速率的想法是不合理的,因為在任何溫度下觀察到的速率是兩種速率,反應速率和變性速率的乘積。
      2.pH的影響:大多數酶對pH敏感并且具有特定的活性范圍。都具有最佳pH值。pH可以通過破壞離子鍵和氫鍵使酶的三維形狀變性(改變)來阻止酶活性。大多數酶的pH值在6到8之間;然而,胃中的胃蛋白酶在pH值為2時效果好,胰蛋白酶在pH值為8時效果好。
      3.底物飽和度:增加底物濃度可提高反應速率(酶活性)。然而,酶飽和度限制了反應速率。當大多數時間所有分子的活性位點都被占據時,酶就會飽和。在飽和點,無論添加多少額外的底物,反應都不會加速。反應速率圖將趨于穩定。
      

    滬公網安備 31011802001676號

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